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| Y染色體微缺失分子檢測(cè)指南 |
前言
在****發(fā)生障礙引起的男性不育患者中，Y染色體微缺失的發(fā)生率僅次于Klinefelter’s syndrome(克氏綜合征)，是居于第二位的遺傳因素。Y染色體微缺失已成為男性不育患者的常規(guī)檢查項(xiàng)目。歐洲男科學(xué)協(xié)會(huì)和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控協(xié)作網(wǎng)為提高診斷質(zhì)量，在1999年和2004年先后發(fā)布了第一版和第二版Y染色體微缺失分子檢測(cè)指南。經(jīng)過(guò)多年的臨床實(shí)踐證明該指南準(zhǔn)確、靈敏和易于操作。2005年4月在上海召開(kāi)了中國(guó)人Y染色體微缺失分子診斷的研討會(huì)，會(huì)議在歐洲指南的基礎(chǔ)上起草了符合目前我國(guó)男性不育診療現(xiàn)狀，并反應(yīng)最新生物技術(shù)發(fā)展的中國(guó)人Y染色體微缺失分子檢測(cè)指南。
實(shí)驗(yàn)指南
Y染色體上存在影響****發(fā)生的無(wú)****因子（AZF）區(qū)域，進(jìn)一步可分為AZFa,AZFb和AZFc三個(gè)區(qū)域。Y染色體微缺失分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)利用多重聚合酶鏈反應(yīng)（multiplex－PCR）特異性擴(kuò)增Y染色體AZF區(qū)域的序列標(biāo)簽位點(diǎn)（STS），擴(kuò)增產(chǎn)物用電泳或雜交等方法進(jìn)行檢測(cè)。
PCR擴(kuò)增后檢測(cè)方法
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物最常見(jiàn)的檢測(cè)方法是瓊脂糖凝膠電泳，本指南也予以推薦。由于每個(gè)泳道有5條擴(kuò)增產(chǎn)物，若其分子量相差太小，電泳時(shí)間將延長(zhǎng)至幾個(gè)小時(shí)甚至過(guò)夜。為了提高效率，選擇引物時(shí)注意各產(chǎn)物條帶之間的長(zhǎng)度差別是否足夠大，電泳時(shí)間控制在1時(shí)以?xún)?nèi)比較合適。
PCR產(chǎn)物經(jīng)毛細(xì)管電泳方法檢測(cè)，靈敏度更高，檢測(cè)更快速，更準(zhǔn)確，易于實(shí)驗(yàn)自動(dòng)化。期待該方法的配套試劑能夠取代目前的傳統(tǒng)檢測(cè)方法。
Y染色體微缺失分子檢測(cè)的臨床意義
Y染色體微缺失遺傳型與表型的關(guān)系已進(jìn)行了大量研究，對(duì)臨床有非常好的指導(dǎo)意義。
AZFa、AZFb和AZFc三個(gè)區(qū)域全部缺失的患者，100％表現(xiàn)為無(wú)****癥。不可能通過(guò)任何手段從睪丸中獲得****。
AZFa區(qū)域整段缺失通常導(dǎo)致唯支持細(xì)胞綜合征（SCO綜合征），臨床表現(xiàn)為無(wú)****癥。如果診斷為整段AZFa區(qū)域缺失，若想從睪丸中獲得****進(jìn)行ICSI已不大可能。
AZFb和AZFb+c整段缺失的典型睪丸組織學(xué)特征是SCO綜合征或生精阻滯。與AZFa區(qū)域整段缺失的情況類(lèi)似，這種病人在睪丸穿刺時(shí)也找不到****。因此，不推薦給這類(lèi)病人施行ICSI。
AZFc缺失的臨床和睪丸組織學(xué)表型多種多樣。一般說(shuō)來(lái)，AZFc缺失患者尚殘存****生成能力。AZFc缺失見(jiàn)于無(wú)****癥或嚴(yán)重少****癥患者，罕見(jiàn)情況下，也可以在自然狀態(tài)下遺傳給其男性后代。在無(wú)****癥患者中，AZFc缺失者通過(guò)TESE獲得****的機(jī)會(huì)要大得多，也可以進(jìn)行ICSI受孕。但這些患者的男性子代將是AZFc缺失的攜帶者。
另外，有研究發(fā)現(xiàn)AZFc區(qū)域缺失的少****癥患者，其****數(shù)目有進(jìn)行性下降的趨勢(shì)，最后發(fā)展為無(wú)****癥。因此，對(duì)AZFc區(qū)域缺失的少****癥患者,應(yīng)及早進(jìn)行治療或?qū)⑵?***進(jìn)行冷凍保存。 |
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