上班接待時間：周一到周五
早上9:00-11:30 下午13：00--17：00
聯(lián)系電話：021-58582937
手 機：13761218727（同微信）
|
|
|
|
| 鑒定知識 |
當(dāng)前位置：首頁 >> 鑒定知識 |
| DNA鑒定之商品化的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物 |
每種STR試劑盒都提供精確分型的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物。要特別注意，Promega和AB公司的試劑盒之間有的相同STR遺傳標(biāo)記，但構(gòu)成等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物中酌等位基因存在差異。如PowerPlex®1.1的D5S818 ladder從7-!5，而Profiler Plus TM則為7-16。通過分型標(biāo)準(zhǔn)物，實驗室在對未知樣本分型時會更加自信。在D5 S818中定義等位基因16時，使用ABI的試劑盒比Promega更可靠，因為ABI的ladder中有等位基因16。表5-4列出了麗個試劑盒的情況和比對。 新近的試劑盒在等位基因ladder中包含大量的等位基因。如IdentifilerTM包含205個等位基因。而PowerPlex® 16的ladder中有209個等位基因。將如此大量的等位基因放在一起并大量生產(chǎn)是很令人欽佩的技術(shù)。 AB公司2001年推出的AmpFlSTR®IdentifilerTM試劑盒使用了兩項新技術(shù)。第一項，也是最顯著的一項，他們使用了5色熒光檢測系統(tǒng)，其中4色熒光(6FAMTM，EICTM，NEDTM ，PETTM)標(biāo)記PCR產(chǎn)物，另一種顏色用于內(nèi)標(biāo)的檢測，以校正PCR產(chǎn)物片段的電泳遷移。而傳統(tǒng)的AmpFISTR或PowerPlex試劑則使用三色熒光標(biāo)記 (5FAM 、JOE、NED或FL、JIE、TMR) PCR產(chǎn)物。因此，用五色系統(tǒng)中的第五種顏色LIZTM和4色系統(tǒng)中的第四色ROX或CXR標(biāo)記是用于內(nèi)標(biāo)標(biāo)記。五色熒光的使用有效地在復(fù)合體系中加入了小片段PCR產(chǎn)物，新的產(chǎn)物被放置在新的熒光信道上，這樣就不用去調(diào)整以前3色泳道上擴增產(chǎn)物長度。 第二項技術(shù)是在試劑盒中引入非核苷酸連接物修正遷移率( ABI,2001)。這一遷移修正物是由6-乙烯氧化物( hexaethyleneoxide，HEO)組成，每一個HEO單位相當(dāng)于2.5個核苷酸( Grossman et al．，1994)。非核苷酸連接物合成在PCR引物的5，端，使產(chǎn)物在末端包含這些額外的分子。這樣就可以使不同基因座的兩個相距很近的產(chǎn)物片段的位置相對移動，從而防止片段重疊。 最初引入遷移修飾物的原因是，在擴增STR基因座時，可繼續(xù)使用原設(shè)計引物和優(yōu)化的不同顏色信道內(nèi)的基因座。如，D7S820初CSFIPO，在COfiler試劑盒中標(biāo)記兩種不同的熒光，因此不相互干擾。而在Identifiler試劑盒中它們標(biāo)記同一種顏色（如6FAM），等位基因產(chǎn)物有13bp的重疊。為防止片段范圍重疊，要么調(diào)整引物結(jié)合位置，要么使用遷移修正物改變產(chǎn)物分子的長度，使其更長。在IdentifilerTM試劑盒中，通過在CSFIPO等位基因引物5′末端加入10個HEO非核苷酸連接物，使其長度增加了約25個bp。非核苷酸連接物還用在IdentifilerTM試劑盒中其他四個基因座上：D2S1338、D13S317、D16S539、TPOX。 Promega公司在PowerPlex的不同版本中改變了引物序列( Masibay et a1．，2000；Butier etal．，2001；Krenke et al．，2002)。例如，在PowerPlex®1.1和PowerPlex®16間，調(diào)整了CSFIPO引物位置，兩個試劑盒的產(chǎn)物相差30bp。引物的改變和后續(xù)產(chǎn)物的變化使得CSFIPO和D16 S539可在PowerPlex®16中使用一色熒光。我們注意到，如果保留原始的CSFIPO馴物，那么在D16S539的等位基因15( 304bp)和CSFIPO等位基因6(29l bp)間會有13個堿基的重疊，不改變產(chǎn)物長度就不能用同一種熒光檢測。更多詳情：http://www.qinzijianding.cn |
|
|
